反相液相色譜法測(cè)定食品中的蘇丹紅1號(hào)

反相液相色譜法測(cè)定食品中的蘇丹紅1號(hào)
甘源，趙艦， 肖義夫，王正虹，顧萬(wàn)江
[摘要] 目的：建立反相液相色譜法測(cè)定食品中的蘇丹紅1號(hào)的方法。方法：食品中的蘇丹紅1號(hào)經(jīng)乙醇提取
后用反相液相色譜一二極管陣列檢測(cè)器（DAD）測(cè)定。結(jié)果：該方法線(xiàn)性范圍從0．5～1000 fig／m1，標(biāo)準(zhǔn)差為0．18，
相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0．73％，平均回收率為95．43％，zui低檢出限為0．2 ng，zui低檢出濃度為0．02 mg／kg。人工合成色素（檸
檬黃、日落黃、胭脂紅、莧菜紅、亮藍(lán)、靛藍(lán)、靛藍(lán)）不干擾其測(cè)定。結(jié)論：該方法線(xiàn)性范圍廣、精密度高、準(zhǔn)確度好、
選擇性強(qiáng)，完滿(mǎn)足食品中蘇丹紅1號(hào)的定性定量分析。
[關(guān)鍵詞] 反相液相色譜；食品；蘇丹紅1號(hào)
[中圖分類(lèi)號(hào)】R122．7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)】1003—8507（2005）12—1760—02
TO Dj朗：嘲’THE SUDAN I IN FOOD USING METHOD OF RE—HI'LC．GAN Yuan，ZHAO Jian，XIAO Yi— ，et a1．
Centrofor Disease Control and Prevention ofChongqing Gty，Chongqing，400042．
Abstaet：Objective：Toevaluatethemethxt of detection of Sudan I infoodsbased OI3．theuseof RE—HPU ．Methods：Sudan
1 in foods were detected by re-HPLC—DAD after extracted by alcoho1．Results：This method could detect Sudan I in samples ef—
fectlvdy while its eoneentrat~on va．~ed from 0．5~g／rnl to 1 000 I-tg／m1．The stan dard deviation WaS 0．18．relative standard devia—
tion was 0．73％ ，an d average recovery Was 94．43％ ． 0．2 ng was observed as its detection limit，while the concentration limit Was
0．2mg／Kg．Artificial synthesized pigments hadI10disturbanceintheprocess．Conclusion：Thismethodisvalidatedintdh ofdetection
limitS，linearity，sensitivity，accuracy an d selectivity in detection of Sudan I in foods．
Keywords：Re—HPLC；Foods；Sudan 1
蘇丹紅1號(hào)化學(xué)名稱(chēng)為1一偶氮苯基一G一萘酚，是用于溶解劑、油彩、蠟、地板蠟、機(jī)油、鞋油、香皂等化工產(chǎn)品中的一種非生物合成著色劑，不溶于水易溶于有機(jī)溶劑乙醇、乙腈、氯仿等，分子式：CJ6Hl2 N20，分子量：248。本品具有致癌性，國(guó)內(nèi)外有關(guān)規(guī)定均嚴(yán)禁在食品中使用蘇丹紅1號(hào)。
1 材料與方法
1．1 原理蘇丹紅1號(hào)染ls}經(jīng)乙醇提取后，超濾，濾液經(jīng)液相色譜Cl8柱分離，用二極管陣列（DAD）檢測(cè)器在478c丌1處進(jìn)行檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，以峰高或峰面積定量。
1．2 儀器與試劑
1．2．1 乙腈（色譜純）、水（超純水，其電阻率>18．2Mf1）、冰醋酸（分析純）、無(wú)水乙醇（分析純）
1．2．2 標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液精密稱(chēng)取0．1000 g蘇丹紅1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品（分析純），以乙醇溶解并轉(zhuǎn)人100ml容量瓶中，并以乙醇稀釋定容至刻度，即為1 g／L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。標(biāo)準(zhǔn)系列的配制：用：丕步稀釋法將乙醇稀釋為0、0．5、[作者單位]重慶市疾病預(yù)防控制中心，重慶，400042
[作者簡(jiǎn)介]甘源（1972-），女，本科，主管技師，主要從事食品衛(wèi)生檢驗(yàn)工作．
1．0、2．0、4．0、10．0及20．0~g／mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

1．2．3 儀器液相色譜儀：AgilentlO00型，具DAD檢測(cè)器，Agilent ZORBAX Cl8柱（150 C'ft×4．6 rnnl，3／an）、萬(wàn)分之一天平、超聲波萃取儀
1．3 樣品前處理樣品制備：將采集樣品放入一個(gè)容量較大的密閉容器中混合均勻。對(duì)于固體樣品要用打漿機(jī)或粉碎機(jī)磨細(xì)。
1．3．1 甜椒或紅辣椒粉稱(chēng)取10 g（準(zhǔn)確至0．01 g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．2 粉狀調(diào)味品稱(chēng)取5 g（準(zhǔn)確至0．01 g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．3 調(diào)味辣椒醬、原味辣椒醬、辣椒油等，稱(chēng)取20 g（準(zhǔn)確至0．01g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
1．3．4 肉及肉制品稱(chēng)取20 g（準(zhǔn)確至0．01 g）樣品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。
以上樣品經(jīng)超聲提取1 h后過(guò)濾于三角瓶中，如果濾液渾濁，則取濾液于12000 r／min離心10 min，濾液根據(jù)待測(cè)物含量的高低進(jìn)行濃縮或稀釋?zhuān)瑴y(cè)定前取一部分過(guò)0．45岬膜，濾液待測(cè)。
1．4 色譜條件流動(dòng)相：0．1％ （體積分?jǐn)?shù)）乙酸+乙腈=20+80：

現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)2oo5年第32卷第12期Modem Preventive Medicine，2oo5，vl01．32，2
色譜柱：Agilent ZORBAX Cl8柱（150 cn1×4．6咖，3／an），柱溫：常溫；流速：1．0 ml／min，恒流；二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：478 nln，峰寬40 nln，參考波長(zhǎng)360 nln，峰寬100 nm；
進(jìn)樣量：10 l。
1．5 方法將配制好的標(biāo)準(zhǔn)系列及處理好后的樣品于上述色譜條件下測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見(jiàn)圖1，樣品色譜圖見(jiàn)圖2。
圖1 標(biāo)準(zhǔn)色譜圖
圖2 樣品色譜圖
2 結(jié)果與討論
2．1 線(xiàn)性范圍的測(cè)定
2．1．1 標(biāo)準(zhǔn)系列1的測(cè)定將0、0．50、1．0、2．0、4．0、10．0、20．0 gg／ml的標(biāo)準(zhǔn)系列，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)10 分析，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 標(biāo)準(zhǔn)系列1的測(cè)定結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn)濃度（gg／mL） 0 0．50 1．0 2．0 4．0 10．0 20．0峰面積（roAU*S） 0 1．12 2．85 4．85 9．72 24．57 48．69以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。回歸方程：y=2．43x+0．076；
a=0．076，b=2．43；7=0．99992．1．2 標(biāo)準(zhǔn)系列2的測(cè)定 將0．20．0、50．0、100．0、
200．0、500．0及1000．0~g／ml的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，每個(gè)進(jìn)10 1分析，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 標(biāo)準(zhǔn)系列2的測(cè)定結(jié)果

面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
回歸方程：y=2．53x一10．17；
a=10．17，b=2．53；7=0．9999
由上述結(jié)果可知，在0．5 ～1000~g／ml范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。
2．2 精密度試驗(yàn)分別取1、10和40 pg／mL標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定9次，其標(biāo)準(zhǔn)差分別為：0．040、0．18和0．30；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）為：1．41％、0．73％和0．31％；測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 3個(gè)濃度精密度試驗(yàn)結(jié)果（gg／m1）
2．3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)于樣品中分別加入2．0，10及40 vg／ml蘇丹紅1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)，作加標(biāo)回收試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（~g／m1）
2．4 zui低檢出限的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)測(cè)得其zui低檢出限0．2 ng，如果樣品取10 g，提取后zui后定容至10 rnl，進(jìn)10 分析，則zui低檢出濃度為0．02mg／kg。
2．5 提取溶劑的選擇本方法選擇了無(wú)水乙醇、乙腈作為萃取劑，經(jīng)檢測(cè)無(wú)水乙醇與乙腈的提取效果相同，本著經(jīng)濟(jì)、安全的原則，zui終確定選無(wú)水乙醇作的樣品的提取溶劑。
兩種溶劑的提取效果試驗(yàn)：分別選取3種不同性狀的樣品，均加入10~g／rnl的蘇丹紅1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用無(wú)水乙醇和乙腈提取，兩種溶劑提取效果無(wú)差異，見(jiàn)表5。
表5 兩種提取溶劑各樣品的蜂面積（mAu*S）
2．6 干擾試驗(yàn)將樣品中分別加入人工合成色素檸檬黃、日落黃、胭脂紅、莧菜紅、亮藍(lán)、靛藍(lán)等，均不干擾蘇丹紅1號(hào)測(cè)定，見(jiàn)圖3。
圖3 混合色素色譜圖